วันอังคารที่ 23 ธันวาคม พ.ศ. 2557

การพัฒนา และประยุกต์การตรวจวิเคราะห์ In vitro apoptin kinase assay



อะพอพทิน (Apoptin) เป็นโปรตีนจากเชื้อไวรัสก่อโรคเลือดจางในไก่ (CIAV) เหนี่ยวนำให้เกิดกระบวนการอะพอพโทซิสในเซลล์เนื้องอกของมนุษย์ โดยไม่ส่งผลกระทบต่อเซลล์ปรกติ โดยกระบวนการนี้ขึ้นกับ Phosphorylation และ relocation ของอะพอพทินเข้าสู่นิวเคลียสของเซลล์มะเร็ง   
                เอนไซม์ Kinase มีฤทธิ์ในการ phosphorylate โปรตีน apoptin โดยอาศัย ATP-dependent fashion อย่างเข้มงวด ภายใต้เกลือที่ระดับต่างๆ การออกฤทธิ์ของเอนไซม์ Kinase พบได้ทั้งในไซโตพลาสซึม และนิวเคลียสของเซลล์เนื้องอกมนุษย์ชนิดต่างๆ
                เทคนิค Q-column chromatography พบว่า ทั้งในไซโตพลาสซึม และนิวเคลียสมีคุณสมบัติ Fractionation characteristics เหมือนกัน บ่งชี้ว่า เอนไซม์ Kinase ทั้งในไซโตพลาสซึม และนิวเคลียสมีคุณสมบัติเหมือนกัน เอนไซม์ Kinase ที่ได้มาจาก Q-column fractions จับกับ Amylose-maltose-binding protein (MBP)-apoptin และสามารถล้างออกด้วย ATP ร่วมกับ cofactor Mg2+ แสดงว่า Unphosphorylated apoptin ทำปฏิกิริยากับเอนไซม์ Kinase แล้วถูกปลดปล่อยมาภายหลังผ่านกระบวนการ Phosphorylation แล้วเท่านั้น แสดงว่า การตรวจวิเคราะห์ของผู้วิจัย สามารถตรวจสอบ Apoptin kinase ได้จริง และยืนยันได้จากการค้นพบว่า อะพอพทินถูก Phosphorylate ได้ที่ตำแหน่ง Thr108 และ Thr107 ทั้งใน in vitro และ in vivo
Lanz, H.L., Florea, B.I., Noteborn, M.H.M. and Backendorf, C. 2012. Development and application of an in vitro apoptin kinase assay. Analytical Biochemisry. 421: 68-74. 

ไม่มีความคิดเห็น:

แสดงความคิดเห็น

วิวัฒนาการเชื้อไวรัสนิวคาสเซิล

  ขณะที่ วัคซีนช่วยลดอุบัติการณ์และความรุนแรงของโรคนิวคาสเซิล การระบาดก็ยังพบได้อยู่ โดยมีอัตราการตายสูง และกำจัดสัตว์ที่ติดเชื้อ มีผลกระทบเ...